Mantenimiento de la inactivación del cromosoma X: exploración con RNA-interferente contra el gen de susceptibilidad a cáncer de mama (BRCA1)

Abstract

La inactivación del cromosoma X (XCI) es un evento epigenético que suprime muchos genes en uno de los dos X en los mamíferos hembras. El mantenimiento de ese estado excepcional de herencia somática depende en parte del remodelamiento de la cromatina. Hace tres décadas publicamos la primera evidencia de la existencia de dos Xa en células de cáncer de mama. Y evidencias recientes involucran a la proteína BRCA1 con remodelación cromatínica. Partiendo de estas observaciones, una citogenética y otra molecular, planteamos la posible relación entre BRCA1 y XCI. Para investigarlo, se abrogó la expresión de BRCA1 en células XiXa, utilizando shRNAs contra el mRNA de la proteína BRCA1. De los clones recombinantes en DH5alpha, se extrajeron los plásmidos psiSTRIKE-Neo-shRNAs, y con ellos se lipo-transfectaron células XiXa. Mediante Western-blot se confirmó el silenciamiento de la proteína BRCA1. Con la secuencia Sh2-RNA de mayor grado de silenciamiento anti BRCA1, se encontró expresión QRT-PCR aumentada en las transfectadas, y para los genes POLA1, PGK1 y OCRL ligados a regiones que no escapan a la inactivación, y para el gen control ZFX que normalmente si escapa a la inactivación (control interno).  
En conclusión, aunque el RNAi anti-BRCA1 no afecta la metilación de promotores de los genes examinados sinténicos al X, si perturba sus niveles de expresión, sugiriendo que BRCA1 si puede afectar el estado de mantenimiento de inactivación de esos loci, lo cual no es incompatible con la postulada acción epigenética de BRCA1 sobre la remodelación de la cromatina.