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Cáncer colorrectal, tamizaje molecular para agregación familiar. Bohórquez et al.

o TGFβR2, a través de diferentes estudios (12, 13). leccionaron en los consultorios de oncología y en los
laboratorios de patología de ciudades en la región an-
Los casos de CCR que presentan una alta inestabilidad dina como Bogotá, Medellín, Ibagué, Cali, pacientes
microsatelital (MSI-H) tienen defi ciencia del sistema menores de 75 años, con CCR de tipo adenocarcinoma
MMR y, por lo tanto, errores de replicación dependien- histológico. Para la obtención de las muestras de tumor
tes de la polimerasa, que se pueden presentar aproxi- y tejido normal, incluidas en parafi na, de los pacientes
madamente en un 12% de los tumores esporádicos y con CCR, se siguieron los siguientes pasos: 1. Consen-
asociados con el síndrome de Lynch; generalmente se timiento informado y carta de permiso para retiro de
localizan en el colon derecho, presentan infi ltración bloques tumorales y normales. 2. Análisis del reporte
por células infl amatorias tipo linfocitos, patrón de cre- de patología, procedente de los laboratorios de patolo-
cimiento expansivo y una diferenciación celular muci- gía de las instituciones participantes. 3. Selección por
nosa, medular o en anillo de sello, y relativamente un comparación con las láminas teñidas, de las correspon-
mejor pronóstico, comparado con los tumores estables dientes no teñidas y mapeo de las mismas. 4. Selección
para microsatélites (MSS) (14). de los bloques incluidos en parafi na (FFPE), en lo posi-
ble tanto de tumor como de tejido normal, para extrac-
El proto-oncogen tipo B de raf (BRAF) codifi ca para ción de ADN. Como método alterno para la obtención
una de las tres kinasas de raf. Está localizado en 7p34, de tejido tumoral y normal, se acordó con los médicos
kinasa serina/treonina; juega un rol en la señalización cirujanos recibir inmediatamente luego de la resección
intracelular y en el crecimiento celular, y es un efector, (colectomía derecha, izquierda, proctolectomía, etc), la
aguas abajo de KRAS, en la vía de señalización pro- muestra de la mucosa normal más alejada del tumor,
tein kinasa (MAPK), mitógeno activada. Pertenece a idealmente a una distancia mayor de 10 cm; las mues-
la familia de las serin-treonin-quinasas-RAF (15), que tras fueron almacenadas a -20°C, hasta su extracción y
incluye además los genes ARAF y CRAF (16). La muta- luego a -80°C. Luego de realizados los respectivos con-
ción BRAF V600E consiste en una transversión de una troles de calidad de los tejidos obtenidos, se realizaron
timina por una adenina en el nucleótido 1.799 de la se- las pruebas moleculares a un total de 575 casos.
cuencia de BRAF (p. Val600Glu); frecuentemente está
asociada con MSI. Se presenta en pacientes con CCR Extracción y Cuantifi cación de ADN:
aserrado en un amplio rango que oscila entre un 5 y La extracción del ADN se realizó por el Kit de Qiagen
un 22%, y aproximadamente en un 15% de casos de “QIAGEN KIT, DNeasy – Blood & Tissue Kit, Cat, N°
CCR esporádico. Se ha logrado asociar las mutaciones 69504” (22) Para tener un acercamiento a la concentra-
en BRAF con una resistencia clínica al tratamiento con ción y calidad del ADN obtenido, al 80% de las mues-
anticuerpos monoclonales dirigidos contra el factor de tras se le realizó una electroforesis en gel de agarosa
crecimiento epidérmico (EGFR). La mutación BRAF al 2%, con tinción con bromuro de etidio; con 5 µl del
V600E en CCR está asociada con características clíni- ADN extraído en cada caso. La cuantifi cación del ADN
co patológicas de alto riesgo, que le confi eren un curso se realizó con el NanoDrop ND-1000 Spectrophotome-
clínico agresivo; por lo tanto, es considerada como un ter, siguiendo las recomendaciones de los fabricantes y
biomarcador de mal pronóstico (17-21). descritas anteriormente (23).

El objetivo de este trabajo fue describir las caracterís- Amplifi cación de microsatelites:
ticas clínico-patológicas del CCR, establecer el estatus El análisis de MSI se realizó mediante PCR con sondas
de inestabilidad microsatelital en el ADN del tejido fl uorescentes, de manera individual para cada micro-
tumoral-normal de los pacientes con CCR, indagar su satélite, basados en el panel de Bethesda, se verifi caron
correlación con la pérdida de expresión de MLH1 y las las secuencias de los cebadores en el sitio web “UCSC
mutaciones en BRAF, con el fi n de determinar su utili- Genome Browser”; el análisis se realizó comparando
dad en el tamizaje del carcinoma colorrectal con agre- el número de picos del tejido normal y tumoral: MSI-
gación familiar. H: alta inestabilidad (3 de 5 marcadores), MSI-L: baja

inestabilidad (hasta 2 marcadores), MSS: estabilidad
Materiales y métodos: (ningún marcador). Tabla 1.

Muestra:
Durante seis años, previa aprobación bioética, se se-

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Rev. Asoc. Col. Cienc.(Col.), 2019; 31: 87-99