Page 90 - Revista 2019

Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas
issn impreso 0120-4173, issn en línea 2500-7459
Tabla 1: Cebadores para la amplifi cación microsatelites - MSI

Cebador hacia adelante Cebador reverso
BAT-26 6TGACTACTTTTGACTTCAGCCAGT TTCTTCAGTATATGTCAATGAAAACA
BAT-25 6TCGCCTCCAAGAATGTAAGT TCTGGATTTTAACTATGGCTC
D2S123 6AAACAGGATGCCTGCCTTTA GGACTTTCCACCTATGGGAC
D5S346 8ACTCACTCTAGTGATAAATCGGG AGCAGATAAGACAGTATTACTAGTT
D17S250 8GGAAGAATCAAATAGACAAT GCTGGCCATATATATATTTAAACC

6: FAM (6-carboxyfl uorescein)
8: HEX (hexachloro-6-carboxyfl uorescein)
Fuente: los autores
Las condiciones de amplifi cación de los microsatelites lumen fi nal de reacción de 20 µl y 39 ciclos de ampli-
incluyeron un protocolo con la enzima MyTaq 2X 3 µl, fi cación.
cada cebador a 10 µM cada uno con 1µl, ADN 5 µl y
dH20 3 µl; se realizaron 39 ciclos de termociclado y fi - Resultados:
nalmente la extensión se realizó a 71°C por 10 minutos.
1.278 casos las ciudades con mayor número de pacien-
Inmunohistoquímica para MLH1 tes son Medellín (29%), Ibagué (21%) y Bogotá (18%)
Se realizaron pruebas de inmunohistoquímica (IHC) y otros municipios de la región andina en menor por-
para verifi car la expresión de la proteína MLH1, con centaje, por lo que se distribuyeron por regiones, así
el Equipo Ventana BenchMark GX (Roche Diagnos- centro 338 (29,7%), noroccidente 308 (24,1%), norte
tics International Ltd.). El proceso de lectura e inter- 132 (10,6%), sur 117 (9,2%).
pretación fue realizado por dos patólogos de manera
independiente-doble ciego, clasifi cando como positiva El CCR se presentó en 680 pacientes del género femeni-
la tinción nuclear fuerte y como negativa la ausencia no (53,2%) y en 598 hombres (46,8%). La distribución
de la misma; adicionalmente, se valoró el porcentaje de por grupo etario, evidenció que el 30,8% (n=394) de los
células positivas entre 0% y 100%; se compararon los pacientes tenía entre 60 y 69 años y el 27,2% (n=347)
resultados y se realizó una revisión, en junta de mínimo entre 50 y 59 años. Sin embargo, llama la atención que
tres patólogos al 10% de los casos positivos, es decir, 339 pacientes (26,5%) presentaron CCR con 50 años o
aquellos que conservaban la expresión proteica y todos menos de edad.
los casos con pérdida de la expresión de la proteína,
también se revisaron en junta de patólogos, aquellos ca- La localización del tumor, se presentó con mayor fre-
sos en los que no hubo concordancia en la observación cuencia en el recto con 397 pacientes (42,6%), seguida
inicial. por la región distal (30%) y proximal (27,3%) (porcen-
taje teniendo en cuenta únicamente los casos con el dato
Amplifi cación y secuenciación de BRAF-V600E por de localización).
PCR convencional
Se probó la mutación BRAF-V600E, los cebadores Inmunohistoquímica para MLH1 - IHC
se diseñaron en el programa PRIMER3 http://www. Un total de 575 casos tenían representación sufi ciente
bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi, en el bloque de parafi na de tumor y normal en sitios cer-
a partir de la secuencia de los exones que contenían canos, se les realizó Inmunohistoquímica para MLH1,
mayor número de mutaciones (hotspot), los cebadores de los cuales 154 (27%) casos no fueron evaluables, las

usados fueron: F: 5'-AGAAATTAGATCTCTTACC- causas más recurrentes fueron: se agotó el tumor en el
TAAACT-3', R: 5'-TTACCATCCACAAAATGGA-3', tejido, se presentaban defectos de fi jación, la tinción fue
tamaño total del producto: 213pb, de acuerdo con la débil en el tumor, no hubo tinción del control interno,
base de datos COSMIC http://cancer.sanger.ac.uk/cos- el tumor era diferente a un adenocarcinoma; 379 (66%)
mic. Los protocolos de amplifi cación se estandarizaron casos presentaron positividad para la expresión de la
en termocicladores de 96 pozos BIORAD C1000®; con proteína y 41 (7%) presentaron negatividad en la expre-

Mytaq 2X, siguiendo los protocolos de termociclado sión de la proteína.
estandarizados, que incluyó cebadores a 10 µM, un vo-

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Rev. Asoc. Col. Cienc.(Col.), 2019; 31: 87-99